注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

明以致远的博客

http://dqzlm1230.blog.163.com/

 
 
 

日志

 
 

高效液相色谱故障汇总  

2009-09-15 14:24:20|  分类: 色谱分析 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |

 

第一篇  高效液相色谱常见故障的判定及解决方法
(
)保留时间变化
1.
柱温变化 柱恒温,必要时需配置恒温箱
2.
等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.
缓冲液容量不够 >25mmol/L的缓冲液
4.
柱污染 每天冲洗柱
5.
柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相
6.
柱快达到寿命 采用保护柱
(
)保留时间缩短
1.
流速增加 检查泵,重新设定流速 
2.
样品超载 降低样品量
3.
键合相流失 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
4.
流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀
5.
温度增加 柱恒温
(
)保留时间延长
1.
流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
2.
硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.
键合相流失 同前()3
4.
流动相组成变化 同前()4
5.
温度降低 同前()5
(
) 出现肩峰或分叉
1.
样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
2.
样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂
3.
柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.
柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.
进样器损坏 更换进样器转子
(
)鬼峰
1.
进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
2.
样品中未知物 处理样品
3.
柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
4.
三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂
5.
水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水
(
) 基线噪声 bC
1.
气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压
2.
污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,HPLC级试剂
3.
检测器灯连续噪声 更换氘灯
4.
电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
5.
检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压
(
)峰拖尾
1.
柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.
峰干扰 清洁样品,调整流动相
3.
硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH,钝化样品
4.
同前()4 同前()4
5.
同前()3 同前()3
6.
死体积或柱外体积过大 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
7.
柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱
(
)峰展宽 同前()1
1.
进样体积过大
2.
在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散
3.
数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于10
4.
检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
5.
流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相
6.
检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器
7.
保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.
柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至最小
9.
样品过载 进小浓度小体积样品

 

第二篇   常见故障及排除
柱压升高 色谱柱入U滤片被流动相或样品中颗粒堵住。样品组分在滤片上沉淀堵住滤片。 卸下入口接头的滤片,使用11的硝酸溶液超声清洗5min,再用水、甲醇清洗除去水份。样品及流动相使用045µm滤膜除去微量杂质。使用流动相作溶剂配制样品。
新柱柱效低 柱外死体积大。样品在流动相中溶解不好,影响传质过程。 更换连接管,重新连接色谱柱,降低死体积。使用合适的流动相或使用流动相溶解样品。
旧色谱柱柱效低,分离不好,柱入口床层塌陷。 填料被流动相溶蚀而流失。 用同型填料填补柱效可部分恢复。对硅胶质填料,流动相PH值在2—7范围内,否则可能被溶蚀。
旧色谱柱柱效低分离不好,有时出现双峰。 入门填料被污染变质所致。 用强溶剂冲洗。刮除被污染的床层,用同型的填料填补柱效可部分恢复。污染严重,则废弃或重新填装。
新柱接到仪器上后,柱头漏液。 柱接头与仪器之间连接管的压环变形量不够。 用扳手顺时针方向拧紧14圈直到不漏液为止。
新柱接到仪器上后,启动仪器没有柱压降。 柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。 继续开泵,用流动相将柱内气体置换掉。
新柱接到仪器上后,检测器出口不断有小气泡出现。 同上。 流动相脱气不彻底特别是MeOHH20体系由于氢键作用很容易出现气泡。 同上。配好流动相后一定要进行脱气处理。
新柱接到仪器上后柱压降不断增加,甚至超过仪器的耐压限。 柱入口滤片被固体颗粒堵塞(或被毒菌堵塞) 更换或清洗柱入口滤片;用045µm过滤膜过滤流动相除去微小颗粒物。
进样次数增加柱压降逐渐增加。 样品中含有不溶于流动相的微小颗粒物。样品在流动相中析出微小结晶。 045µm过滤膜过滤样品。推荐使用流动相溶解样品。
使用段时间后,柱效下降,分离不好。 柱填料被流动相溶解而流失。柱填料被样品杂质污染。 推荐使用予柱。如柱床层塌陷,用相同型号填料填补。推荐使用保护柱或用强溶剂冲洗色谱柱除去污染杂质。
柱使用一段时间后,柱效下降出现双峰。 柱入口床层被污染使柱填料变质。 用强溶剂冲洗除去杂质。
柱使用段时间后,柱效下降,出现峰拖尾。 柱入口床层被污染。 用强溶剂冲洗20-30ml,若效果不明显应废弃。
进样量增大与峰面积增加不成正比.即进样量与峰面积不是线性关系。 样品在流动相中的溶解度小,只有部分样品被流动相冲如色谱柱中而另一部分则沉积在柱人口端。 用流动相溶解样品。样品的浓度不宜太大。进样量不宜过大。
使用缓冲液作流动相时,柱压降升高很快。 霉菌生长所致。 在流动相中加入有毒物质或加叠氯化钠防止霉菌生长。实验结束后先用纯水后用MeOH各冲洗20-30ml后关机。
5µm颗粒填料柱时, MeOHH20作流动相柱压较高。 MeOH与水之间由于氢键作用黏度增大。 可用乙腈/水体系使柱压降低,分离效率更好。
长时间放置的色谱柱,出现双峰。 柱床层出现干裂。 柱放置时,最好使用相应的溶剂充填好,防止受大的机械震动,如床层干裂应废弃掉。
流动相洗涤强度由弱渐强时出现很多杂质峰。 强溶剂将弱溶剂洗不出的杂质冲出来。 不影响柱的性能。
柱使用一段时间后保留值逐渐缩短。 柱中固定相流失所致。 更换色谱柱。检查所用的色谱条件是否合适。
U V色谱图中,靠近死时间处出现负峰。 进样时压力波动所致。样品溶剂比流动相的UV吸收值低。 采用阀进样。用流动相溶解样品。

 
第三篇    岛津LC-4A液相色谱仪紫外检测器故障检修两例
 故障现象一:1mV定标时,峰值为负
  分析及检修:此故障的原因有两方面,1.紫外检测电路,即电流放大器A101A102,对数放大器A201A202有故障;2.光路部分的故障。
  将D2断开,关闭光路,在无信号的情况下调节调零电阻,包括粗调、细调旋钮,见终端显示基线可调零,说明电路部分工作正常,问题在光路部分。用无水乙醇清洗比色池,将手动波长调节旋钮调到零光谱,看光斑是否在比色池前的入口中央。其上下位置偏移影响波长的精度,左右位置偏移影响峰值。现光斑上下位置尚可,而左右位置不准,偏向参比池一边。先调D2灯的前后位置,使光斑与入射狭缝两侧的定位孔左右对齐,再调反光镜M1的固定螺丝A,使光斑上下位置与定位孔对齐。调反射M2位置,即调节固定M2螺丝使光斑在比色池前的入口中央,此时光路调整完备。校正波长后,开机后一切正常。
  故障现象二:基线漂移、干扰大
  分析与检修:LC-4A紫外检测器由光学系统、液体输送系统、紫外接收及放大电路等部分组成。其原理是:D2灯发出紫外光经透镜M1M2反射到光栅,由光栅分出不同波长的光。紫外光经比色池到紫敏二极管D1D2D1D2分别为测量和参比二极管。同一波长下不同浓度的样品对紫外光的吸收不同,在D1紫敏管上产生不同的电流,此电流经A101A102放大而产生不同电压信号。基线漂移、干扰大,原因有如下几方面:(一)经过比色池的液体有气泡;(二)紫敏管性能不稳定;(三)放大器的电源电压和D2的电源电压不稳定;(四)放大器的性能差、不对称等。

 检查时,首先将比色池的液体吸干,排除因气泡引起的干扰。打开密封紫敏管及比色池的盖,在自然光的照射下,测电流放大器的输出MoRo,电压均为14.8VDC,且稳定。重新上好密封盖,断开D2灯电源,在暗电流下测MoRo,电压均为0V,故紫敏管正常。测电源电压,D2阳极电压为90VDC、灯丝电压为3V,放大器的正、负电源分别为+15.12VDC-15.09VDC,均较稳定,说明故障在放大器部分。用1MΩ电阻二个分别代替D1D2,将A101A102放大器输入端短路,看CRT显示,基线仍有干扰。测MoRo分别有不到1V的且不稳定信号。用信号发生器输入10mV20Hz的信号,用示波器测MoRo输出端信号,可看到信号失真且不稳定。查放大器电路元件C101R101C102R102正常。故A101A102有故障。此元件为高精度、低漂移集成运算放大器,型号为OPA104CM。用AD515J同性能运算放大器更换,在放大器输入为0V时,调电阻R103R104,即补偿电阻,使放大器输出MoRo0V±0.2mV。更换调试后,开机一切正常。

第四篇    色谱保留时间漂移的故障排除
    保留时间不重现有两种不同的情况:既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化,而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如,保留时间的漂移往往由柱老化引起;而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上,保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化,如固定相流失(例如通过水解),色谱柱污染(由样品或流动相所致)等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下:
色谱柱平衡
    如果我们观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡色谱柱。
流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。
固定相稳定性
    固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的PH范围内使用,固定相也会慢慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。
色谱柱污染
    保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。
样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取(SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响。
避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。
使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
流动相组成
   流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。
疏水坍塌
   当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时,有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象,这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相,再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱(如Waters SymmetryShield RP色谱柱)或非端基封口的色谱柱(如Waters Resolve色谱柱)也可避免发生坍塌

  评论这张
 
阅读(455)| 评论(0)
推荐 转载

历史上的今天

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2017